如何提高限制性酶切的反应效率
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1、DNA纯度在DNA样品中若含有蛋白质,或没有去除干净制备过程中所用的乙醇、EDTA、SDS、酚、氯仿和某些高浓度金属离子,均会降低限制酶的催化活性,甚至使限制酶不起作用;
2、 酶切消化反应的温度DNA消化反应的温度,是影响限制内切酶活性的一个重要因素。不同的核酸内切限制酶,具有各自的最适反应温度。多数限制内切酶的最适反应温度是37摄氏度,少数限制性内切酶的最适反应温度高于或低于37摄氏度;
3、DNA的分子结构DNA分子构型对核酸内切限制酶的活性有很大影响,如消化超螺旋的DNA比消化线性DNA用酶量要高出许多倍。有些限制酶在消化它们自己的处于不同部位的限制位点,其效率也有明显差异。限制性内切酶反应的终止,通常是采用65摄氏度条件下温浴5分钟。
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